
A,左,HPLC色谱图显示了相反的阶段C18杂体MACULATA毒液的分馏;标记了包含HM1A和HM1B的峰。上面显示了通过Edman降解确定的肽序列。中间,MALDI – TOF光谱的原生未消除的HM1B(顶部)和天然HM1B用羧肽酶y消化20分钟(底部),插入的光谱显示了达尔顿顿(DA)中每个群的单异位质量。在完整和消化的HM1B之间观察到的质量差为146 Da,对应于最终残基PHE,其伴侣为C末端。正确,色谱图显示了本机和合成HM1A的反相C18 HPLC曲线,当共注射时是无法区分的。B,来自卵母细胞(黑色)和(灰色)浴在ICA-121431(500 nm)之前表达HNAV亚型的代表性电流。在1 Hz刺激期间引起电流以诱导使用依赖性块。C,TOP,HM1A与SGTX1的氨基酸序列比较,SGTX1是一个相关但非选择性的快速灭活抑制剂。底部,比较ICA-121431介导的HM1A-或SGTX1诱发响应反应的代表性钙成像实验,培养的胚胎DRG神经元中的HM1A-或SGTX1诱发响应与右组数据(** p <0.01,*** p <0.001,n = 4)。D,顶部的P0小鼠神经元的部分响应HM1A与SGTX1相比(** P <0.01)。底部,在存在和不存在ICA-121431(500 nm)的情况下,SGTX1(500 nm)引起的比率钙反应。E,用于HM1A抑制快速失活的剂量 - 反应曲线,表达NAV1.1,NAV1.2或NAV1.3。将100毫秒脉冲结束时的持续电流归一化为峰值电流,以量化效果的幅度。HNAV1.1 = 38 nm,HNAV1.2 = 236 nm和HNAV1.3 = 220 nm的EC50值。F,来自卵母细胞在100毫秒去极化期间纯化的HM1B的饱和剂量(ON HNAV1.1)的代表性痕迹。g, 测试了含有不同NAV1.9 S3B – S4基序的RKV2.1嵌合体对HHM1A(100 nm)的敏感性。代表性痕迹(顶部)和摘要数据(底部)显示每个嵌合体缺乏毒素灵敏度。H,左上,来自卵母细胞(黑色)和(红色)浴在HM1A(5μM)之后的卵母细胞的代表性电流。中间,通过合成或天然HM1A对MKV4.1封锁的定量。右上,在应用天然或合成HM1A(1μM)应用过程中持续电流的比较显示对NAV1.1失活的相似作用。底部,代表性迹线(左)表明,P0三叉神经元中的外电流不受HM1A(500 nm)的影响。散点图(右,n = 10)没有显着差异。I,通过钙成像评估的各种培养条件下HM1A(500 nm)响应神经元的百分比(n = 3-4,*p <0.05)。误差线代表平均值±S.E.M.P值基于双向方差分析,并带有事后Tukey的测试(C)或未配对的两尾学生的t检验(D,I)。